動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的6大物理作用

　　動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的六大物理功能包括pH值、緩沖液、滲透耐受性、溫度、粘度、表面張力和泡沫。下面為大家具體介紹這些物理作用在細(xì)胞培養(yǎng)基的詳解。

　　1.PH

　　大多數(shù)細(xì)胞系在 pH 7.4 下生長(zhǎng)良好。細(xì)胞增殖的最佳 pH 值在細(xì)胞系之間變化很小。一些正常的成纖維細(xì)胞系在 pH 7.4-7.7 下生長(zhǎng)最好，而一些轉(zhuǎn)化細(xì)胞系在 pH 7.0-7.4 下更適合。 據(jù)報(bào)道，上皮細(xì)胞可以維持在 pH 5.5。通過(guò)簡(jiǎn)單的生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)或特殊功能分析來(lái)確定最佳 pH 值。

　　酚紅常被用作pH指示劑。pH 7.4 為紅色，pH 7.0 為橙色，pH 6.5 為黃色，pH 7.6 為紅色略帶藍(lán)色，pH 7.8 為紫色。

　　2.緩沖

　　細(xì)胞培養(yǎng)基必須在兩種條件下具有恒定的緩沖作用。一是在開放培養(yǎng)條件下釋放二氧化碳會(huì)提高 pH 值，二是用致密細(xì)胞轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系會(huì)產(chǎn)生大量二氧化碳。以及導(dǎo)致 pH 值下降的乳酸。 可以添加緩沖液以穩(wěn)定 pH 值。

　　碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)比其他緩沖系統(tǒng)更常使用，因?yàn)樗鼈冊(cè)谏?pH 值下的緩沖能力低，但它們的低毒性、低成本和對(duì)培養(yǎng)物的營(yíng)養(yǎng)影響。HEPES在pH 7.2-7.6具有比其他緩沖系統(tǒng)強(qiáng)得多的緩沖作用，廣泛使用的濃度為10 mmol / L或20 mmol / L。

　　3.滲透壓

　　大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)滲透壓具有廣泛的耐受性。由于人體細(xì)胞質(zhì)的滲透壓約為290 mOsm/kg，這是體外人體細(xì)胞的最佳值，與其他細(xì)胞不同(如小鼠約為310 mOsm/kg)。事實(shí)上，大多數(shù)細(xì)胞在 260-320 mOsm / kg 時(shí)完全存活。較高的滲透壓通常會(huì)減慢細(xì)胞生長(zhǎng)，但也會(huì)加快蛋白質(zhì)產(chǎn)品的合成。因此，文獻(xiàn)中有報(bào)道稱可將細(xì)胞培養(yǎng)基的滲透壓提高到360 mOsm/kg，以增加單克隆抗體的產(chǎn)量。

　　4.溫度

　　溫度不僅直接影響細(xì)胞生長(zhǎng)，而且影響pH值。這是因?yàn)?CO2 溶解度在低溫下增加，緩沖液電離和 pKa 發(fā)生變化，細(xì)胞培養(yǎng)基的 pH 值相應(yīng)發(fā)生變化。調(diào)節(jié)室溫，使其比 36.5°C 低 0.2 個(gè) pH 單位。初次制備培養(yǎng)基時(shí)，最好將培養(yǎng)基加入血清中，并在適當(dāng)?shù)臍怏w條件下于36.5°C孵育樣品過(guò)夜以檢查pH值。

　　5.黏度

　　細(xì)胞培養(yǎng)粘度主要受血清含量的影響，在大多數(shù)情況下，不影響細(xì)胞增殖。但是，如果需要攪動(dòng)細(xì)胞懸浮液(例如，如果攪動(dòng)懸浮培養(yǎng)或胰蛋白酶處理后細(xì)胞解離)，則細(xì)胞培養(yǎng)基的粘度是一個(gè)重要因素。高粘度和更少的細(xì)胞損傷。如果在攪拌過(guò)程中細(xì)胞受到損傷，可以使用羧甲基纖維素、聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮來(lái)增加培養(yǎng)基的粘度，減少細(xì)胞損傷。當(dāng)血清水平低或沒(méi)有血清時(shí)，這一點(diǎn)尤其重要。

　　6.表面張力和泡沫

　　細(xì)胞培養(yǎng)基的表面張力可以促進(jìn)培養(yǎng)物對(duì)培養(yǎng)基的附著，但很少以任何方式加以控制。在懸浮培養(yǎng)中，在含血清培養(yǎng)基中鼓泡含有 5% CO2 的空氣會(huì)產(chǎn)生氣泡。硅油消泡劑的加入有助于降低表面張力，防止泡沫的形成。