原代細(xì)胞傳代方法哪有幾種

　　原代細(xì)胞是從人體組織(人體組織、小鼠組織、大鼠組織、兔組織等)中通過蛋白酶等方法獲得并在體外培養(yǎng)以模擬人體的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。

　　培養(yǎng)的原代細(xì)胞和繼承至第10代的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)物。原代細(xì)胞在人工條件下的存活、增殖、增殖和遺傳，以及細(xì)胞生命過程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞工程等方面的研究。

　　那么關(guān)于原代細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，我們應(yīng)該怎么做呢?一般有以下兩種方法：

　　一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代

　　1. 吸出或倒出瓶中的舊培養(yǎng)基。

　　2. 加入約1ml消化液(與胰蛋白酶或 EDTA 混合)，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使培養(yǎng)瓶底部的細(xì)胞浸入溶液中。

　　3.消化2～5分鐘后，將培養(yǎng)瓶置于顯微鏡下觀察，原來貼壁的細(xì)胞逐漸變圓，如果還沒有漂浮，則棄去消化液培養(yǎng)。添加溶液以完成消化。

　　4.用移液管將貼壁細(xì)胞吹入懸浮液中，分別接種2-3個(gè)培養(yǎng)瓶，置于37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

　　二、懸浮細(xì)胞的傳代

　　1、直接傳代

　?、俅〖?xì)胞慢慢沉淀在瓶底后，吸去1/2～2/3的上清液。

　?、谝埔盒纬杉?xì)胞懸液后，再接種到另外2-3個(gè)培養(yǎng)瓶中，放入37℃培養(yǎng)箱中。

　　2、離心法傳代

　　①將細(xì)胞連同培養(yǎng)基一起轉(zhuǎn)移到離心管中，800-1000 rpm 離心5分鐘。

　　②除去上清液，在離心管中加入新的培養(yǎng)液，用移液管吹去，制成細(xì)胞懸液。

　?、蹖⒓?xì)胞懸液接種到 2-3 個(gè)單獨(dú)的培養(yǎng)瓶中，置于37°C的培養(yǎng)箱中。