細(xì)胞凋亡
一、服務(wù)簡(jiǎn)介：
凋亡細(xì)胞對(duì)所有用于細(xì)胞活性鑒定的染料如PI有抗染性，壞死細(xì)胞則不能。細(xì)胞膜有損傷的細(xì)胞的DNA可被PI著染產(chǎn)生紅色熒光，而細(xì)胞膜保持完好的細(xì)胞則不會(huì)有紅色熒光產(chǎn)生。因此，在細(xì)胞凋亡的早期PI不會(huì)著染而沒(méi)有紅色熒光信號(hào)。正?；罴?xì)胞與此相似。在雙變量流式細(xì)胞儀的散點(diǎn)圖上，左下象限顯示活細(xì)胞，為（FITC-/PI-）；右上象限是非活細(xì)胞，即壞死細(xì)胞，為（FITC+/PI+）；而右下象限為凋亡細(xì)胞，顯現(xiàn)（FITC+/PI-）。
二、樣本要求：
- 固定的細(xì)胞樣本：制備的單細(xì)胞懸液離心后，去除上清，加入2-3ml完全培養(yǎng)基，4℃運(yùn)輸。
- 固定前細(xì)胞數(shù)量不少于2*106個(gè)/樣本。
三、實(shí)驗(yàn)流程：
- 細(xì)胞收集：懸浮細(xì)胞直接收集到10ml的離心管中，每樣本細(xì)胞數(shù)為（1~5）×106/mL 500~1000r/min離心5min，棄去培養(yǎng)液。
- 用孵育緩沖液洗滌1次，500~1000r/min離心5min。
- 用100ul的標(biāo)記溶液重懸細(xì)胞，室溫下避光孵育10~15min。
- 500~1000r/min離心5min沉淀細(xì)胞孵育緩沖液洗1次。
- 流式細(xì)胞儀分析：流式細(xì)胞儀激發(fā)光波長(zhǎng)用488nm，用一波長(zhǎng)為515nm的通帶濾器檢測(cè)FITC熒光，另一波長(zhǎng)大于560nm的濾器檢測(cè)PI。
