細(xì)胞周期
一、服務(wù)簡介：
細(xì)胞周期（Cell Cycle）是指細(xì)胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全部過程。按照染色體DNA含量也可以分為3個時相：G0/G1期，發(fā)生在DNA復(fù)制之前，染色體表現(xiàn)為二倍體（2N）；S期，DNA正在復(fù)制，但還沒有全部完成，染色體介于二倍體和四倍體之間（2N<染色體<4N）；G2/M期，DNA復(fù)制過程已完成，染色體表現(xiàn)為四倍體（4N）。
細(xì)胞周期各時相的DNA含量不同，通常正常細(xì)胞的G1/ G0 期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量（2N），而 G2/ M 期具有四倍體細(xì)胞的DNA含量（4N），而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。
PI（碘化丙啶）可以與DNA結(jié)合，其熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量。
二、樣本要求：
- 固定的細(xì)胞樣本：制備的單細(xì)胞懸液離心后，去除上清，加入2-3ml預(yù)冷70%乙醇，于-20℃固定16h以上，4℃運(yùn)輸。
- 固定前細(xì)胞數(shù)量不少于2*106個/樣本。
三、實(shí)驗(yàn)流程：
- 細(xì)胞培養(yǎng)處理，細(xì)胞鋪板培養(yǎng)，待細(xì)胞生長達(dá)到60%-70%，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求處理(比如加入藥物)，繼續(xù)培養(yǎng)。
- 細(xì)胞收集，用胰酶消化細(xì)胞，吹打成單細(xì)胞懸液，800rpm離心5min,收集細(xì)胞沉淀，上清保留，用預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞，制備成單細(xì)胞懸液。
- 細(xì)胞固定，制備的單細(xì)胞懸液離心后，去除上清，加入2-3ml預(yù)冷70%乙醇，于-20℃固定16h以上。
- 細(xì)胞染色，1000rpm 離心5min 后棄上清，用2ml的PBS洗滌2次(注意避免Dnase污染),加入適量的周期染料，37C避光孵育30min。
- 上機(jī)前過濾，PI具有很強(qiáng)的粘附性,容易形成細(xì)胞聚團(tuán)，建議可以使用200目的篩網(wǎng)過濾樣本后上機(jī)。
- 上機(jī)分析，低速上樣本，建議有效的單個細(xì)胞采集10000個以上。
