原代細胞培養(yǎng)中常見的問題有哪些

　　根據(jù)傳統(tǒng)定義，通過自組織收集和接種的細胞稱為原代細胞。這些細胞直接與組織分離，生命周期有限，經(jīng)過幾次傳代后逐漸停止生長。原代細胞需要在有限的生命周期內獲得細胞生長空間，以保持細胞群的基因型和表型一致性。

　　細胞系是一組不斷生長分化的細胞，其基因改造具有無限的生長潛力。體外培養(yǎng)的細胞系用于醫(yī)學或科學研究。

　　倍增和代數(shù)有什么區(qū)別?

　　倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)的翻倍，通常指的是細胞指數(shù)或對數(shù)生長期。代數(shù)是細胞群從培養(yǎng)瓶中取出的次數(shù)和傳代過程，傳代的目的是保持細胞密度低，促進進一步增殖。

　　接收到的凍存細胞該如何處理?

　　收到包裝后，立即將冷凍保存的細胞從干冰轉移到液氮中并冷凍保存。該過程盡可能快地完成以避免加熱。不要將細胞儲存在-80°C，因為它們會對細胞造成無法修復的損壞。

　　如何開始培養(yǎng)冷凍細胞?

　　(1) 從液氮罐中取出裝有細胞的管子，注意保護手和眼睛。

　　(2)將凍存管迅速放入37℃水浴中，輕輕旋轉，直至管內內容物完全融化。

　　(3) 立即將冷凍管從水箱中取出，擦干，轉移到無菌環(huán)境中。

　　(4) 用 70% 酒精清洗冷凍管并擦去多余的酒精。

　　(5)打開蓋子注意不要碰到里面的螺紋(低溫恒溫管的負壓在打開蓋子時可能會造成少量溢出，但這是正常操作)。

　　(6) 用聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶(或參照說明書)。大多數(shù)細胞的推薦接種密度為每平方厘米 5000 個細胞。

　　(7) 蓋上培養(yǎng)瓶蓋，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶，使細胞分布均勻。如果需要換氣，可以打開蓋子。

　　(8) 將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中(37°C，5% CO2，95%空氣)。

　　(9) 放入培養(yǎng)箱后6～16小時，換液一次，去除殘留的二甲亞砜和未貼壁的細胞。