詳細(xì)介紹下原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件

　　原代細(xì)胞非常接近并能反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性，適用于藥敏試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。原代細(xì)胞培養(yǎng)物，也稱為原代培養(yǎng)物，是從供體體外獲得的組織細(xì)胞的一種培養(yǎng)物。這是建立細(xì)胞系的一個(gè)步驟和基本技術(shù)。下面介紹下原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細(xì)胞要徹底沖洗干凈，盡可能消除消化液的毒性。

　　2、細(xì)胞接種濃度要稍高，至少5×108個(gè)細(xì)胞/L。

　　3. 培養(yǎng)基可在Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)中培養(yǎng)。

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%;

　　必須在含 5.5% CO2 的 37°C 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

　　6、前兩天減少震動(dòng)，防止剛貼壁的細(xì)胞脫落漂浮。

　　7、如果電芯基本貼壁生長(zhǎng)并逐漸形成網(wǎng)絡(luò)，則需要更換原電池。

　　8. 使用骨髓或外周血中的漂浮細(xì)胞培養(yǎng)1周時(shí)，細(xì)胞懸液在更換培養(yǎng)基前應(yīng)低速離心。

　　二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;

　　2、短期培養(yǎng)可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行。

　　3. 可在5至8 x 109 / L的細(xì)胞濃度范圍內(nèi)進(jìn)行瓶試驗(yàn)。

　　4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)在淋巴細(xì)胞中加入生長(zhǎng)因子，在白血病細(xì)胞中加入少量原患者血清，以促進(jìn)細(xì)胞增殖。

　　5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;

　　6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。