簡(jiǎn)單介紹下原代細(xì)胞的提取方法

　　原代細(xì)胞是通過(guò)一定的方法如酶法或機(jī)械法或生長(zhǎng)法使細(xì)胞從人體和動(dòng)物的母體器官、組織或液體中分離出來(lái)，并在受控環(huán)境條件下分離的細(xì)胞在體外或其他人體和動(dòng)物體內(nèi)生長(zhǎng)。

　　原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟：

　　1)所有操作應(yīng)在干凈通風(fēng)的超凈工作臺(tái)下進(jìn)行，所有設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行高壓滅菌。

　　2) 根據(jù) BALB/c 小鼠的體重，使用 10 ml/kg 的 3% 戊巴比妥鈉麻醉，并將小鼠置于含有 75% 乙醇的燒杯中。這一步不僅可以對(duì)鼠標(biāo)進(jìn)行消毒，還可以制作體毛。它被浸濕，在隨后的剃須過(guò)程中不會(huì)粘在剪刀或紙巾上。

　　3) 用鑷子輕輕抬起小鼠心臟，將裝有PBS的注射器插入心尖，在右心耳處切開(kāi)一個(gè)小口，慢慢推動(dòng)注射器，隨著心臟的跳動(dòng)，將體內(nèi)的血液沖洗出來(lái)。

　　4) 取出小鼠肺組織，將肺組織切成小米粒大小，放入預(yù)冷的HBSS中，反復(fù)洗滌數(shù)次。

　　5) 將小米大小的肺組織放入培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶前一天，用1%的明膠溶液在4°C下過(guò)夜，將培養(yǎng)瓶放置在培養(yǎng)瓶中。(將溫度恢復(fù)到37度)，放入37度培養(yǎng)箱消化4小時(shí)。

　　6)消化4小時(shí)后，加培養(yǎng)基(加普通培養(yǎng)基的兩倍量)繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)(培養(yǎng)時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞粘附情況調(diào)整)。

　　7)24小時(shí)后，取出肺組織，顯微鏡下觀察細(xì)胞情況，交換體液。

　　8) 原電池的提取和培養(yǎng)是一個(gè)非常緩慢的過(guò)程。在顯微鏡下通常需要 24 小時(shí)才能看到小細(xì)胞群，而卵石排列只能在一兩周內(nèi)看到。

　　9)當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞長(zhǎng)成單層時(shí)，會(huì)發(fā)生接觸抑制，所以每2-3天更換一次原電池。因此，內(nèi)皮細(xì)胞可以在接近單層時(shí)傳代。不要等到內(nèi)皮細(xì)胞非常飽滿。