原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟

　　原代細(xì)胞是通過(guò)一定的方法如酶法或機(jī)械法或生長(zhǎng)法使細(xì)胞從人體和動(dòng)物的母體器官、組織或液體中分離出來(lái)，并在受控環(huán)境條件下分離的細(xì)胞在體外或其他人體和動(dòng)物體內(nèi)生長(zhǎng)。

　　原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟：

　　1)所有操作，必須在超凈工作臺(tái)下進(jìn)行，通風(fēng)、清潔，所有設(shè)備必須高壓滅菌。

　　2)根據(jù)BALB/c小鼠體重，采用3%戊巴比妥鈉10 ml/kg麻醉，將小鼠置于含75%乙醇的燒杯中。這一步不僅可以對(duì)鼠標(biāo)進(jìn)行消毒，還可以制作全身的毛發(fā)。在隨后的剃須過(guò)程中，它浸濕了，不會(huì)粘在剪刀和紙巾上。

　　3)用鑷子輕輕抬起小鼠心臟，將裝有PBS的注射器插入心尖，同時(shí)切開(kāi)右心耳的小口，慢慢按壓注射器，洗去血液。身體仿佛心臟在跳動(dòng)。

　　4) 取出小鼠肺組織，關(guān)掉肺組織至小米粒大小，然后反復(fù)洗滌數(shù)次，放入預(yù)冷的HBSS中。

　　5) 將小米大小的肺組織放入培養(yǎng)瓶中(培養(yǎng)瓶前一天，用1%的明膠溶液在4°C下過(guò)夜，在培養(yǎng)表面涂上培養(yǎng)瓶。處理小鼠前，將培養(yǎng)瓶放回37度培養(yǎng)箱中的溫度)，置于37°培養(yǎng)箱中，消化4小時(shí)。

　　6)消化4小時(shí)后，加入2倍量的培養(yǎng)基(正常培養(yǎng)基)繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)(根據(jù)細(xì)胞貼壁情況調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間)。

　　7) 24小時(shí)后，取出肺組織，在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)以換液。

　　8) 原電池的提取和培養(yǎng)是一個(gè)非常緩慢的過(guò)程。在顯微鏡下通常需要 24 小時(shí)才能看到一小群細(xì)胞，一兩周后你會(huì)看到鵝卵石般的排列。

　　9)為接觸抑制和內(nèi)皮細(xì)胞形成生長(zhǎng)單層發(fā)生，原電池每2-3天更換一次。因此，它可以傳代并且內(nèi)皮細(xì)胞更接近單層。不要等到內(nèi)皮細(xì)胞變得非常飽滿。