購(gòu)買到原代細(xì)胞之后應(yīng)該注意什么事項(xiàng)

　　原代細(xì)胞是從體內(nèi)取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的一代細(xì)胞和10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞直觀的理解就是不能無(wú)限繼承。無(wú)論您是自己提取細(xì)胞還是從試劑公司購(gòu)買細(xì)胞，我們都建議您使用 P2-P3 代完成實(shí)驗(yàn)。因此，掌握原代細(xì)胞的提取培養(yǎng)技術(shù)，盡可能多地保持細(xì)胞的良好狀態(tài)，對(duì)實(shí)驗(yàn)的成敗至關(guān)重要。那么購(gòu)買到原代細(xì)胞之后應(yīng)該注意什么事項(xiàng)。

　　1. 接收細(xì)胞時(shí)，在顯微鏡下觀察是否有污垢。在收到細(xì)胞前幾天，在各種放大倍數(shù)下拍照，在顯微鏡下記錄以防止細(xì)胞問(wèn)題，并與公司聯(lián)系好。

　　2. 收到細(xì)胞后不要立即處理。將其放入培養(yǎng)箱中并放置 4 小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間，然后再操作。如果你不著急，可靜置過(guò)夜。

　　3、細(xì)胞一次傳代時(shí)，傳代密度要高。原代細(xì)胞的低傳代密度使增殖變得困難。建議1:2-1:3傳代。

　　4. 原代細(xì)胞(如內(nèi)皮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞)傳代后，0.25% + 0.53 nM 胰蛋白酶處理，1 ml 消化液 37 度培養(yǎng)箱 30 秒，然后加入 5 ml 培養(yǎng)基(正常消化，貼壁細(xì)胞體積) ) 我們使用的胰蛋白酶和培養(yǎng)基是 1:1 但原代細(xì)胞需要用大量培養(yǎng)基中和)。

　　5. 不建議冷凍原代細(xì)胞，因?yàn)槔鋬霰４嫒菀讓?dǎo)致復(fù)活失敗。如果您想凍結(jié)，我們建議在 P2 或 P3 代凍結(jié)。冷凍溶液中的血清越多越好。推薦比例為 9(血清)：1(DMSO)。

　　6、原代細(xì)胞復(fù)蘇后，37-38℃水浴解凍，加入10ml培養(yǎng)基(如正常貼壁細(xì)胞復(fù)蘇，也可按此比例。復(fù)蘇成活率會(huì)大大提高)，離心重懸鋪板。