原代細胞分離提取優(yōu)化的七步

　　原代細胞分離是指將組織分散在細胞懸液中，然后從組織中獲得靶細胞的過程。獲得高純度、高活性的原代細胞是許多細胞實驗成功的關(guān)鍵因素之一。但是，很多小伙伴會在這個關(guān)鍵步驟會出現(xiàn)問題，所以，自己動手分離原代細胞，是非常有必要的。

　　分離原代細胞的方法有很多：浮動離心、直接組織封閉、酶消化、非酶消化、機械分散等。今天，我們主要來看看常用的方法——酶消化法。

　　1、無菌

　　確保使用消毒器、試劑和技術(shù)來收集和處理組織。使用個人防護設(shè)備以避免污染。所有酶和試劑均使用 0.22 微米膜進行無菌過濾。

　　2、切塊

　　使用無菌剪刀或手術(shù)刀將組織標本切成小塊(通常為 2 x 4 毫米)，然后將小塊放入選定的緩沖液、培養(yǎng)基或鹽溶液中。

　　3、加酶

　　將組織洗滌 3 次以去除多余的血液蛋白質(zhì)，然后加入任何酶，如膠原酶、蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶。一般酶量為0.5mg/ml～1.5mg/ml左右。

　　4、孵育

　　將組織樣本在其適宜溫度下孵育，通常在37℃下孵育30～90分鐘。定期混合或輕輕搖動標本。

　　5、洗滌

　　輕輕吸管(也稱為研磨)以分散細胞并使用細網(wǎng)過濾細胞懸液。沉淀細胞并倒出多余的含液體酶。洗2-3次。含有 FBS、BSA 或其他抑制劑的清潔溶液也可用于防止酶消化。

　　6、分析

　　在正確的培養(yǎng)基或緩沖液中重懸細胞以量化細胞產(chǎn)量和活力。由于這是細胞分離過程中的一個重要步驟，因此可以評估解離技術(shù)的結(jié)果。大多數(shù)研究人員使用血細胞計數(shù)器測量細胞產(chǎn)量，使用臺盼藍重氮染料測量細胞活力。

　　7、培養(yǎng)

　　這個適合，就可以根據(jù)所分離的細胞來選擇適合研究的方案和處理步驟來培養(yǎng)細胞了。