細(xì)胞合成培養(yǎng)基的配制步驟及注意事項

　　雖然各種培養(yǎng)基的成分不同，但制備市售干粉培養(yǎng)基的方法是相似的。大多數(shù)合成培養(yǎng)基的生產(chǎn)是標(biāo)準(zhǔn)化和商業(yè)化的，市場上有更常用的培養(yǎng)基。自備培養(yǎng)基的方法大多已不再使用，除按需要特殊配制專用培養(yǎng)基外。下面原代細(xì)胞廠家的小編就來介紹下細(xì)胞合成培養(yǎng)基的配制步驟及注意事項。

　　1.配制用品

　　濾器、微孔濾膜、磁力攪拌器、O2、天平、燒杯、量筒、貯液瓶、瓶塞、注射器、pH計、NaHCO3、培養(yǎng)基、三蒸水、胎牛(小牛)血清、NaOH、 HCI、青霉素、鏈霉素。

　　2.配制步驟

　?、贉?zhǔn)備干粉介質(zhì) 將全溶液的2/3用蒸餾水溶解3次，沖洗包裝袋兩次，倒入介質(zhì)中，加入磁力攪拌器，將其完全置于磁力攪拌器上。攪拌以確保培養(yǎng)物完全溶解的基質(zhì)干粉。

　?、诟鶕?jù)產(chǎn)品包裝說明要求和實驗需要添加LVDS3和谷氨酰胺。

　?、厶砑涌股兀航K濃度為青霉素100U/mL和鏈霉素100ug/mL。(一般市售青霉素80萬單位/瓶。溶于4毫升3蒸餾水，每升培養(yǎng)基加0.5毫升。市售鏈霉素1克/瓶。溶于5毫升。每升加0.5毫升文化。)

　　④加入所需濃度的56℃水浴滅活胎牛血清(或其他)，加蒸餾水3倍至終體積。(目前，所有血清均已滅菌。)

　?、菡{(diào)節(jié)介質(zhì)的pH值：一般市售的干粉介質(zhì)的pH值在溶解后是一個比較穩(wěn)定的值，但液體配制所用的蒸餾水的3倍，不同濃度的加入等。是幾個因素。由于添加血清或使用 CO2 壓力過濾，制劑的 pH 值可能會發(fā)生變化。因此需要強(qiáng)調(diào)的是，制備過程中使用新鮮配制的3蒸餾水，加入人血清后調(diào)節(jié)pH值。過濾和滅菌應(yīng)采用O2壓濾。常規(guī)培養(yǎng)物的 pH 值呈弱堿性，可用 HCl 溶液調(diào)節(jié)。使用時，將預(yù)先配制好的HCl溶液緩慢加入堿性液體中，調(diào)節(jié)攪拌均勻。pH計或pH準(zhǔn)確度試紙將觀察并調(diào)整結(jié)果以達(dá)到pH 7.2-7.4。

　?、?過濾除菌上述溶液。使用的過濾器分別是 0.22um 和 0.45um 的膜，它們定期高壓滅菌。

　?、邔⑦^濾后的無菌培養(yǎng)液分裝到貼有標(biāo)簽的無菌液儲存瓶中，塞上，玻璃紙浸泡75%乙醇，4℃保存。

　　3.注意事項

　?、儆糜谂渲婆囵B(yǎng)液和培養(yǎng)液的HCl和NaOH溶液的pH值必須用新配制的三蒸水配制，一般在配制當(dāng)天配制，以保證水的純度和質(zhì)量。

　?、诟鞣N制備培養(yǎng)基的器具需要徹底清洗干燥，以備后用。

　?、垡话阍谂渲婆囵B(yǎng)液時不需要加熱輔助溶解。

　　④培養(yǎng)液配制好后，需要進(jìn)行滅菌試驗，確認(rèn)培養(yǎng)液沒有被污染。制備培養(yǎng)物所需的血清質(zhì)量必須穩(wěn)定，并且應(yīng)盡可能在同一實驗中使用同一批血清。

　?、菝颗渲频囊后w量應(yīng)使用2周左右，以免因時間過長造成營養(yǎng)流失。