介紹下細(xì)胞株的保存與操作方法

　　關(guān)于有些人總是會遇到養(yǎng)的細(xì)胞形狀怎樣都欠好的問題。這個其實(shí)是有一個方法可以改善的。下面原代細(xì)胞廠家的小編就來介紹下細(xì)胞株的保存與操作方法。

　　1、紫外線消毒30分鐘后，關(guān)閉紫外線燈管，在正常操作條件下打開超凈臺，用酒精對操作者的手進(jìn)行消毒。

　　2、確認(rèn)瓶身干凈后，將必要的培養(yǎng)液和胰酶放在工作臺面上，點(diǎn)燃酒精燈，用酒精棉球擦拭培養(yǎng)液和胰酶瓶口，再將瓶口對準(zhǔn)在酒精燈上消毒2-3次。擰開瓶蓋，重新對瓶口和瓶蓋進(jìn)行消毒，然后將它們放在酒精燈的兩端。特別是將栽培基瓶放在傾斜的架子上，將瓶口對準(zhǔn)酒精燈，靠近酒精燈放置，將瓶蓋放在酒精燈的對面。

　　3、用酒精燈對培養(yǎng)瓶的瓶口消毒2-3次，將瓶口和瓶蓋各松開2-3次，將瓶蓋放在酒精燈的右側(cè)，掛起來。培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液進(jìn)入臟水槽，用酒精燈對瓶口消毒2-3次，直立放好。取 1 ml 移液管，在酒精燈上快速旋轉(zhuǎn) 1-2 次進(jìn)行消毒，然后接上移液器吸頭，加入 1.5 ml 胰脂肪酶溶液，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中。

　　4. 隔著瓶壁培養(yǎng)細(xì)胞層，培養(yǎng)胰脂肪酶約40秒，立即站在光照下檢查細(xì)胞和一兩個掉落的細(xì)胞之間的孔狀間隙。這是胰脂肪酶的好時機(jī)。如果您看到細(xì)胞碎片從瓶壁上掉下來，那是由于胰蛋白酶消化過度。如果您沒有看到孔狀裂縫或細(xì)胞掉落，則應(yīng)繼續(xù)消化并輕輕平放培養(yǎng)瓶。胰蛋白酶可以使細(xì)胞層下沉 1 秒鐘，然后主動勃起檢查細(xì)胞在光線下的狀況。這可以重復(fù)幾次，直至呈現(xiàn)針孔樣縫隙和1-2個細(xì)胞掉落的消化狀況。用移液器將胰酶吸凈。

　　5. 將 1 ml 冷凍保存液放入培養(yǎng)瓶中，并用移液器加入少量培養(yǎng)基。輕輕反復(fù)沖洗培養(yǎng)瓶壁 5-8 次，使附著的細(xì)胞完全落下。孵育培養(yǎng)基并輕輕移液 2-3 次，以盡可能將細(xì)胞保持在單一懸浮液中。

　　6. 將 1 ml 含有細(xì)胞的冷凍保存液轉(zhuǎn)移到新的種子管中并蓋上蓋子以創(chuàng)建實(shí)驗(yàn)符號。

　　7. 將培養(yǎng)瓶口和瓶蓋消毒2-3次，然后擰緊，關(guān)閉酒精燈，抬起實(shí)驗(yàn)室工作臺，取出實(shí)驗(yàn)試劑及污缸等，封閉超凈作業(yè)臺。

　　8、將種管放入4℃冰箱30分鐘，取出放入-20℃冰箱過夜，-80℃冰箱3-4天。第二天，儲存在-196°C的液氮中。長期儲存。