詳細講解下細胞培養(yǎng)基的滅菌及儲存

　　根據(jù)細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細胞培養(yǎng)基大致分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基和化學成分有限的細胞培養(yǎng)基。下面詳細講解下細胞培養(yǎng)基的滅菌及儲存。

　　1.不同細胞培養(yǎng)基的除菌方式及注意事項

　　細胞培養(yǎng)基的滅菌方法可分為高壓滅菌和膜過濾滅菌，但滅菌方法可能不同，因為不同的培養(yǎng)液所含的營養(yǎng)成分不同。

　　某些介質(zhì)(如 MEM)可以高壓滅菌。這種類型的培養(yǎng)基通常不含 L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，通常在培養(yǎng)基經(jīng)過高壓滅菌后加入。也可以用耐高壓谷氨酸(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)代替L-谷氨酰胺。高壓滅菌的滅菌培養(yǎng)基可以在121°C、15 psi、15分鐘的條件下達到完全的滅菌效果和小的營養(yǎng)損失，而無需延長滅菌時間。

　　大多數(shù)細胞培養(yǎng)基不適合高壓滅菌。由于培養(yǎng)液中常含有維生素、蛋白質(zhì)、多肽、生長因子等，容易因高溫和輻射而發(fā)生變性和功能喪失，因此上述液體大多經(jīng)過過濾消毒以去除細菌?？捎糜谶^濾和滅菌的濾膜有很多，其中大部分是聚醚砜(PES)、尼龍、聚碳酸酯、醋酸纖維素、硝基纖維素、聚四氟乙烯和陶瓷。膜過濾滅菌現(xiàn)在是一種比較普遍和方便的方法，常使用0.2μm孔徑的過濾膜，有的使用0.1μm孔徑的過濾膜。與高壓過濾相比，過濾膜的使用壽命更長，價格也更高，但對細胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)的不良影響較小。

　　2.不同細胞培養(yǎng)基存儲過程中的注意事項

　　一般情況下，避免在-20°C下冷凍保存液體細胞培養(yǎng)基。解凍過程中可能有營養(yǎng)物質(zhì)沉淀，影響培養(yǎng)效果。正常條件下2-8°C避光保存。使用前從冰箱中取出并在室溫下平衡。普通液體培養(yǎng)基的保質(zhì)期為 6 至 12 個月。避免長期儲存液體細胞培養(yǎng)物。隨著儲存時間的增加，谷氨酰胺會慢慢分解。如果細胞生長不足，請考慮測試培養(yǎng)物中的谷氨酰胺含量以確定是否添加谷氨酰胺。市售液體細胞培養(yǎng)基有有效期。使用干粉細胞培養(yǎng)基單獨配制液體后，應在低溫(2-8°C)下保存。除了培養(yǎng)基中谷氨酰胺容易降解外，培養(yǎng)基中的其他成分也會隨著溫度的升高而降解或沉淀。