購買到原代細(xì)胞之后應(yīng)該注意什么

　　原代細(xì)胞是從體內(nèi)取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人將培養(yǎng)的一代細(xì)胞和10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞直觀的理解就是不能無限繼承。我們建議您使用 P2-P3 代完成實(shí)驗(yàn)，無論您是自己提取細(xì)胞還是從試劑公司購買細(xì)胞。因此，提取和培養(yǎng)原代細(xì)胞并盡可能多地保持良好細(xì)胞狀態(tài)的技能對(duì)實(shí)驗(yàn)的成敗至關(guān)重要。那么對(duì)已經(jīng)購買的細(xì)胞之后應(yīng)該注意什么注意事項(xiàng)呢。

　　1. 接收細(xì)胞時(shí)，在顯微鏡下觀察是否有污垢。在收到細(xì)胞前幾天，在各種放大倍數(shù)下拍照，在顯微鏡下記錄以防止細(xì)胞問題，可以跟公司很好地溝通。

　　2. 收到細(xì)胞后不要立即處理。將其放入培養(yǎng)箱中并放置 4 小時(shí)或更長時(shí)間，然后再操作。如果你不著急，可靜置過夜。

　　3. 細(xì)胞一次傳代，需要增加細(xì)胞密度才能傳代。原代細(xì)胞傳代密度低，難以增殖。建議告訴1：2-1：3。

　　4.原代細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞等)傳代后，0.25%+0.53nM胰蛋白酶處理，1ml消化液37度培養(yǎng)箱30秒，5ml培養(yǎng)基(貼壁細(xì)胞正常消化，用量我們用胰蛋白酶和培養(yǎng)基為 1:1，但原代細(xì)胞需要用大量培養(yǎng)基中和)。

　　5. 不建議冷凍原代細(xì)胞，因?yàn)槔鋬霰４嫒菀讓?dǎo)致復(fù)活失敗。如果您想凍結(jié)，我們建議在 P2 或 P3 代凍結(jié)。冷凍溶液中的血清越多越好。推薦比例為 9(血清)：1(DMSO)。

　　6. 待原代細(xì)胞復(fù)蘇后，將細(xì)胞在37-38度水浴中解凍，加入10ml培養(yǎng)基(此比例也可用于復(fù)蘇正常貼壁細(xì)胞，復(fù)蘇存活率顯著提高)，離心重懸鋪板。