簡(jiǎn)單了解一下原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件

　　原代細(xì)胞是通過蛋白酶等方法從組織(人體組織、小鼠組織、大鼠組織、兔組織等)中獲得的細(xì)胞，并在體外培養(yǎng)以模擬機(jī)體。下面來了解一下原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：

　　1、持久粘附細(xì)胞(包括半粘附細(xì)胞培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細(xì)胞要徹底沖洗干凈，盡可能消除消化液的毒性。

　　2、細(xì)胞接種濃度略高，至少5×108細(xì)胞/L

　　3、培養(yǎng)基可在Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)中培養(yǎng)。

　　4、胎牛血清濃度為10%-80%。

　　5、必須在37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

　　6、前兩天盡量減少震動(dòng)，防止剛剛貼壁的細(xì)胞脫落和漂浮。

　　7、一旦細(xì)胞基本貼壁生長并逐漸形成網(wǎng)絡(luò)，就需要更換原代細(xì)胞。

　　8、用骨髓或外周血漂浮細(xì)胞培養(yǎng)1周時(shí)，細(xì)胞懸液在換液前應(yīng)低速離心。

　　二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;

　　2、 短期培養(yǎng)可在含10%牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行。

　　3、可在5至8 x 109 / L的細(xì)胞濃度范圍內(nèi)進(jìn)行瓶試驗(yàn)。

　　4、長期培養(yǎng)時(shí)，在白血病細(xì)胞中加入少量患者原血清，為淋巴細(xì)胞添加生長因子，促進(jìn)細(xì)胞增殖。

　　5、一般每3天更換一半的細(xì)胞外液。

　　細(xì)胞傳代通常發(fā)生在促進(jìn)細(xì)胞增殖和細(xì)胞密度高時(shí)。