詳細介紹原代細胞的取材方法

　　從動物體內(nèi)取出各種組織，用各種酶(常用的胰蛋白酶)、螯合劑(常用的EDTA)或機械方法將其分散在單個細胞中，在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細胞能夠存活、生長和再生，這個過程稱為原代培養(yǎng)。

　　培養(yǎng)原代細胞的流程通常是采樣→分離→培養(yǎng)和維護，今天我們將重點介紹如何對原代細胞進行采樣。

　　人和動物細胞的選擇是原代細胞培養(yǎng)成功的關鍵條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。

　　取材的基本要求：

　?、?取材要注意新鮮和保鮮

　　② 應嚴格無菌

　?、?防止機械損傷

　?、?去除無用組織和避免干燥

　　⑤ 應注意組織類型、分化程度、年齡等

　?、?作好記錄

　　各類組織的取材技術：

　?、?皮膚和粘膜的取材

　　它主要在手術過程中取自皮膚，類似于撕裂皮膚的手術，但面積通常為 2-4 平方厘米。

　?、?內(nèi)臟和實體瘤的采集

　　內(nèi)臟除消化道外基本是無菌的，但所需組織的種類和位置易于理解，采集材料時需要熟悉。 對于實體瘤，去除腫瘤細胞豐富的部分，避免潰瘍、壞死和液化。防止污染。盡量去除混合結締組織。

　?、?血液細胞的取材

　　血細胞和淋巴細胞通常通過采集外周血或從淋巴組織(脾、扁桃體、胸腺、淋巴結等)中分離細胞來采集，但采集時要小心抗凝劑。

　?、?骨髓、羊水、胸/腹水細胞采集

　　嚴格滅菌，注意抗凝，盡快分離培養(yǎng)，離心后用不含鈣、鎂的PBS洗2次，再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng)，不宜低溫存放。

　　⑤ 動物組織取材

　　I 鼠胚組織取材

　　先用頸引法或氣管窒息法殺死孕期合適的動物，在盛有75%酒精的燒杯中浸泡5分鐘(時間防止酒精進入體內(nèi))，注意不要時間過長)?？诨蚱渌绊懡M織活力的通道)，取出動物，用無菌圖釘或別針固定在無菌木板上的四肢，切割皮膚，以無菌方式解剖胚胎，或使用無菌止血鉗 用無菌眼科剪刀固定皮膚?？拷|干中心的皮膚并用止血鉗夾住兩側的皮膚，頭部向尾部拉。把動物反包，暴露軀干，然后再固定，更換無菌解剖器材，采用無菌操作法解剖取出胚胎。

　　II 幼鼠胚腎(或肺)取材

　　將幼犬按上述方法屠宰消毒后，將腹部固定在木板上，剪下游離皮毛并拉向一側，打開胸腔并無菌取出肺部，或將背部固定在木板上.然后剪掉背部的毛發(fā)，向兩側拉動，從背部無菌打開腹腔取腎。

　?、?雞(鴨)鳥類胚胎組織取材步驟

　　1.收集在合適的胚齡(9～12天)孵化的受精卵，在黑暗中打開收集卵燈，觀察，如果有豐富血管，胚體有運動的胚蛋，說明胚體發(fā)育良好，并用有色筆劃出氣室和胚體位置。

　　2、將胚蛋放在蛋架上，先用溫水清洗蛋殼，然后用75%酒精棉墊擦干。

　　用碘酒和75%酒精消毒后，用剪刀或鑷子無菌打開氣室，沿氣室邊緣取出蛋殼。

　　3、用眼科鑷撕去殼膜，暴露出雞胚;

　　4、用彎頭鑷輕挑起胚頭，取出胚胎，放入無菌平皿中，解剖取材。